植物组织原位杂交检测服务-科锐诺(商家)

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    2024-5-19

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菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,植物组织原位杂交检测服务,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定dna。

(6) 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。






原位杂交

实验原理

原位杂交技术(in situhybridization)是以标记的---分子为探针,在组织细胞原位检测特异---分子的技术。

使含有特异序列、经过标记的---单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补---单链即靶---发生杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的dna或rna分子。




意义

在研究dna分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成dna-dna、dna-rna或 rna-rna 双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p、荧光素生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mrna或dna 的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有---的敏感性和特---,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。




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