分子病理技术服务-武汉科锐诺生物

杂交结束后，去除杂交液，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×ssc和0.1% sds溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

把滤膜放在纸巾上于室温晾干后，把滤膜（编号面朝上）放在一张保鲜膜上，并在保鲜膜上作几个不对称的标记，以使滤膜与性自显影片位置对应。

用第二张保鲜膜盖住滤膜。加x片并加上增感屏于-70℃---12-16小时。

底片显---，在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置，同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸，通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。

 滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。

  .滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加生物素化---化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。

dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，分子病理技术服务，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。

.苏1木素复染，充分水洗。

酒精脱水，二甲1---透明，封片。