科锐诺生物-突触三维重构检测服务

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    2024-1-22

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在显微镜下观察人体组织,必须将组织切成以微米为单位的薄片,使其透光并易于观察,但直接切取柔软组织是难以办到的。 石蜡包埋法是将“支持物质”-石蜡渗入组织内部,而水与石蜡又是不相混合的,所以在浸蜡和包埋前必须将组织内所含的水分脱去。一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

 由于酒精和石蜡不能混合,再用或冬青油置换出组织中的酒精,使其透明,然后放入融化的石蜡中。石蜡包埋--将浸蜡的组织块置于包埋框中,冷却后组织块便具有石蜡的硬度,切片机便能将组织切成薄片。切片进行连续切片,厚5μm左右,放入45℃漂烘仪内进行展片。待蜡片展平后进行裱片。将切片放置60c温箱3~5h,使切片粘贴牢固,待用。但是需要注意的是切片时必须保持切片刀锐利,切片要薄而平整、烤片的温度不宜过高,高温烤片对抗原有破坏作用。






石蜡包埋切片实验基本步骤主要有以下几步:

1、取材:新鲜组织固定于4%---24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

2、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水---i 30min-无水---ii 30min-醇---5-10min-i5-10min-ii5-10min-蜡i1h-蜡ii1h-蜡iii 1h。

3、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水---组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。






常见的生物切片,厚度一般在几微米的程度,突触三维重构检测服务,这种厚度制作起来比较简单,除了可以使用自动化的设备来切片之外,手动操作也能切到这种厚度,而且完够满足光学显微镜下观察的标准。不过在的科研领域里,需要观察更细微的细胞结构,甚至需要从分子的层面来进行研究,这时候就需要用到电子显微镜。然而电子显微镜也需要更薄的样品,切片至少要达到0.1微米的厚度,而这种切片也就被称为是超薄切片,在很多实验研究里需要厚度达到50纳米,显然手i操作是无法达到这种厚度的。那么在实验环境下是怎样做成这种超薄生物切片的呢?首先是需要进行---的固定,因为在如此薄的尺度之下,不但基本的细胞结构都已经被完全破坏,而且其中的细胞器也都被切开,里面的生物酶会释放出来,并且在很短的时间内使细胞结构遭到破坏。所以就需要在取得样品之后尽快进行固定,要求在一-分钟之 内完成这项操作,然后再使用对应的材料来做透明化以及包埋,接下来还需要配合的切片机来完成切片的过程,从而达到理想的厚度。







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