植物花芽原位杂交技术服务-科锐诺

后固定：胃蛋白酶---后才需要。固定液为1%---/0.1 m pbs（ph7.2-7.6），含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

  原位杂交的预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

   杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次；37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特---染色，重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。

　　荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization，fish)技术基本原理与显色原位杂交相同，不同之处在于fish是应用荧光素标记的探针与组织细胞中待测---反应形成杂交体，并采用荧光显微镜或激光共---显微镜观察信号表达。为了同时检测多个靶位，在荧光原位杂交技术的基础上发展起来一种新技术，即多彩色荧光原位杂交

滴加fitc-tsa：滴加fitc-tsa试剂，避光室温反应5min。后tbst洗3次×10min，pbs洗1次×5min。

dapi复染核：切片滴加dapi染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。

镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，植物花芽原位杂交技术服务，发射波长420nm，发蓝光；fam(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；cy3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。）

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