





在酵母双杂交系统中,bd与x蛋白融合,ad与y蛋白融合,如果x、y之间形成蛋白-蛋白复合物,ad与bd会在空间上充分接近,重新构成结构域,启动报告基因的转录。拥有bd质粒的酵母可以在某一缺陷培养基上生长,拥有ad质粒的酵母菌可以在另一种缺陷培养基上生长,通过接合(mating)或共转化使酵母同时拥有ad与bd质粒。如果bd上的目的蛋白与ad上的诱饵蛋白存在相互作用,这样的酵母可以在三缺及四缺的培养基上生长,并启动β-半乳糖苷酶基因的转录。

滴加fitc-tsa:滴加fitc-tsa试剂,避光室温反应5min。后tbst洗3次×10min,pbs洗1次×5min。
dapi复染核:切片滴加dapi染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。
镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;fam(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;cy3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)
水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达,但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。
在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明,mads29在花药、胚珠和种子中均表达,玉米原位杂交检测服务,且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等,研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达,进而影响胚乳发育。

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