植物基因组原位杂交技术服务-科锐诺

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    2023-11-21

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武汉科锐诺生物科技有限公司提供植物基因组原位杂交技术服务-科锐诺。













适用场景

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

酵母双杂交技术的优点

1、无需纯化蛋白;

2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;

3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;

4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cdna---,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。









后固定:胃蛋白酶---后才需要。固定液为1%---/0.1 m pbs(ph7.2-7.6),含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

  原位杂交的预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。

   杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次;37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特---染色,重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。

     





滴加fitc-tsa:滴加fitc-tsa试剂,避光室温反应5min。后tbst洗3次×10min,pbs洗1次×5min。

dapi复染核:切片滴加dapi染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。

镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,植物基因组原位杂交技术服务,发射波长420nm,发蓝光;fam(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;cy3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)





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