分子病理技术服务-科锐诺生物

后固定：胃蛋白酶---后才需要。固定液为1%---/0.1 m pbs（ph7.2-7.6），含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

  原位杂交的预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

   杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次；37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特---染色，重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。

原位末端凋亡检测（tunel）

实验原理： tunel技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋亡细胞进行染色，能准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性---内切酶被而将自身染色体dna切断成缺口或3-oh末端片段这一特点，利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物(如，生物素或荧光素)的脱氧核苷酸转移到3-oh末端，再用组化法或荧光检测凋亡细胞。