rna原位杂交技术服务-科锐诺生物科技

原位杂交第二天

1.

1）将探针回收，放于－20c保存（通常探针可重复使用十次左右）。

2）加入50%---胺/2xssct溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。

3）置换2xssct1ml，60℃，放置15分钟。

4）置换0.2xssct1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。

2.

1）用mabt洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。

2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4c 冰箱过夜。

水稻种子是人类重要的食物来源，其发育涉及一个复杂的调控网络，其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子，已有的研究表明，几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达，但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。

在这项研究中，研究组基于前期的表达谱研究基础，分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明，mads29在花药、胚珠和种子中均表达，rna原位杂交技术服务，且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等，研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示，mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达，进而影响胚乳发育。