荧光原位杂交技（fish）原理：是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交，通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技（fish）实验步骤：
1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液（depc水配制）中固定2-12h。
2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。
3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min，风干，depc水浸泡。
5、---：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10分钟，tunel检测服务，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。
分子病理检测的意义：
通过分子检测协助病理诊断
某些肿1瘤具有特定的分子病理学改变，对于病理常规染色难于诊断的这些肿1瘤，进行分子病理检测可协助得出准确的病理诊断。例如淋巴1瘤的鉴别诊断往往依赖于形态和免1疫组化的综合判断，但有些时候，这些手段也不能满足诊断的需要，这时我们通过ig或tcr基因重排检测，可协助鉴别淋巴细胞的普通增殖和肿1瘤性增殖。
原位杂交第三天
1） 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlmabt置换，25分钟，再用1mlmabt溶液置换，一小时以上，后用1mlmabt溶液置换，25分钟。
2） 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次，每次放置五分钟。
3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul bm purple ap substrate（底物，用之前加5mm左旋米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。
4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用pbst洗两三次后加上4%---固定，拍照。
6）4c冰箱保存。
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