荧光原位杂交技（fish）原理：是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交，通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技（fish）实验步骤：
1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液（depc水配制）中固定2-12h。
2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。
3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min，风干，depc水浸泡。
5、---：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10分钟，自然冷却。后基因笔画圈，rna原位杂交技术服务，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。
分子病理应用的检测样本主要包括石蜡组织、新鲜组织、脱落细胞、全血及其他---等。石蜡切片标本厚度应在4-6μm，切片数量依据组织大小而定。样本对检测结果和分析---，病理---需要对可评估的样本进一步明确病理诊断，并评价标本有无出血、坏死和不利于---的前处理(例如含hcl脱钙液处理)，病变细胞(如细胞)的总量和比例，避免假阴性。进行ngs检测前需通过病理诊断明确其的性质及含量，根据不同类型选择合适的基因panel测序。组织标本中细胞含量建议达到20%以上，低于此标准可富集后检测。未经病理评估的---结果不可单独用于分子病理---诊断目的。
原位杂交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的pbst溶液，放置5分钟。
2） 置换成30%的pbst溶液，放置5分钟
3） 置换成pbst溶液，放置5分钟，重复一次
4） 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟5） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。
蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。
2） 用pbst溶液轻洗，在pbst中放置5分钟。
3） 用4%---的pbs溶液固定20分钟，室温。
4） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。
2. 预杂交
1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。
2）用等体积的hyb+取代hyb－。
3）60℃水浴，预杂交4小时以上。
3. 杂交
1）吸去预杂交的hyb+，加上100ul已加入探针的hyb+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..
2）60℃ 温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。
rna原位杂交技术服务-科锐诺由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司是湖北 武汉 ,技术合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、---发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在科锐诺---携全体员工热情欢迎---垂询洽谈，共创科锐诺美好的未来。
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