花芽原位杂交测试服务-科锐诺生物

原位杂交杂交液注意事项：

       （1）杂交液内除含一定浓度的标记探针外，还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体dna或rna等。

       （2）杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加，可以减低探针与组织标本之间的静电结合。---胺可使tm降低，杂交液中含每1%的---胺可分别使rna：rna，rna：dna，dna：dna的杂交温度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以杂交液中加入适量的---胺，可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。---葡聚糖能与水结合，从而减少杂交液的有效容积，提高探针有效浓度，以达到提高杂交率的目的（尤其对双链---探针）。

       在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体dna或rna等，都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特---结合，以减低背景。

既要充分保留被测---，（---是rna）不被降解，又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。

步骤：基本与免1疫组织化学技术相似，即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%---/0.1 m pbs（ph7.0-7.6），花芽原位杂交测试服务，含有1/1000 depc。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经rna酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳，40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃---温冰箱，在-20℃可保存２～３周，在-70℃可保存数月之久。

荧光定量pcr(realtimepcr)技术是近几年基于普通pcr技术发展的一种新技术。它借助荧光信号来检测pcr产物，通过荧光染料或荧光标记的特异探针，对pcr产物进行标记---，在扩增过程中，每经过一次循环，荧光定量pcr仪就会收集一次荧光信号，实时检测整个pcr进程。用荧光定量pcr法检测目的基因仅需检测样本是否具有扩增信号即可，且pcr反应具有---扩增的高1效性，可检测出微小突变。根据探针标记不同可分为taqman探针法和aｒms法。

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